植物原生質(zhì)體是除去細(xì)胞壁后為原生質(zhì)所包圍的“裸露細(xì)胞”，是開(kāi)展基礎(chǔ)研究的理想材料，在植物遺傳工程和育種研究上具有廣闊的應(yīng)用前景。

酶解法分離原生質(zhì)體是一個(gè)常用的技術(shù)，其原理是植物細(xì)胞壁主要由纖維素、半纖維素和果膠質(zhì)組成，因而使用纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶能降解細(xì)胞壁成分，除去細(xì)胞壁，即可得到原生質(zhì)體。

植物原生質(zhì)體分離的方法分為機(jī)械分離法和酶解分離法。

機(jī)械分離法：先將細(xì)胞放在高滲糖溶液中預(yù)處理，待細(xì)胞發(fā)生輕微質(zhì)壁分離，原生質(zhì)體收縮成球形后，再用機(jī)械法磨碎組織，從傷口處可釋放出完整的原生質(zhì)體。

用機(jī)械法分離細(xì)胞的明顯優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞不會(huì)受到酶的傷害，有利于開(kāi)展生理生化研究。一般只用于薄壁組織排列松散、細(xì)胞間接觸點(diǎn)很少的葉肉細(xì)胞，產(chǎn)量低，不易獲得大量活性細(xì)胞。

酶解分離法：指將材料放入能降解細(xì)胞壁的混合等滲酶液中保溫一定時(shí)間，在酶液的作用下，細(xì)胞壁被降解，從而獲得大量有活力的原生質(zhì)體的方法。

常用的酶種類：纖維素酶類（纖維素酶cellulase、半纖維素酶hemicellulase、崩潰酶driselase）、果膠酶類（果膠酶pectinase和離析酶macerozyme）、蝸牛酶snailase、胼胝質(zhì)酶callosease等。

草本植物體細(xì)胞分離原生質(zhì)體

利用纖維素酶類和果膠酶類中的2-3種酶組合成的混合酶液即可達(dá)到原生質(zhì)體分離的目的，纖維素酶濃度一般為0.5％-3％，果膠酶濃度為0.1％-1％（見(jiàn)下表）。

木本植物體細(xì)胞分離原生質(zhì)體

由于細(xì)胞壁的構(gòu)成與草本植物有所不同，因此其混合酶液的組成和濃度與草本植物有差異。分解木本植物細(xì)胞壁，纖維素酶是不可缺少的，其濃度范圍與草本植物相同，但果膠酶的使用比草本植物更普遍（見(jiàn)下表）。

由于原生質(zhì)體內(nèi)部與外界環(huán)境之間僅隔一層薄薄的細(xì)胞膜，必須保持在滲透壓平衡的溶液中才能保持其完整性。其次,還應(yīng)當(dāng)考慮取材、酶的種類和純度、酶液的滲透壓、酶解時(shí)間及溫度等因素對(duì)分離原生質(zhì)體的影響。

從理論上講，植物體的任何一部分都可以通過(guò)酶解作用去除細(xì)胞壁而得到原生質(zhì)體。但在實(shí)際操作中，只有幼嫩的組織才能完成去壁的過(guò)程。所以，為了制備健康的原生質(zhì)體，一般選用根尖、莖尖、嫩葉及對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的愈傷組織為材料，一旦細(xì)胞具有木質(zhì)化或次生加厚的外壁，則不能被酶降解。

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