百瑞極——免疫學(xué)三大實(shí)驗(yàn)的區(qū)別
想檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣本中的靶蛋白,但是ELISA、WB、IHC傻傻分不清,到底應(yīng)該選擇哪種方法呢?又該如何開展實(shí)驗(yàn)?zāi)兀? 本文總結(jié)整理了ELISA、WB、IHC的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)流程,幫大家順利搞定實(shí)驗(yàn)!
鎳-瓊脂糖凝膠FF主要用于純化帶組氨酸標(biāo)簽(His-Tag)的重組蛋白。純化原理是利用重組蛋白組氨酸標(biāo)簽的咪唑環(huán)可與過渡金屬Ni2+形成穩(wěn)定的配位鍵,因此能特異、牢固、可逆地吸附于固定這些金屬離子的基質(zhì),結(jié)合了His-Tag重組蛋白的鎳-瓊脂糖凝膠FF一般通過增加咪唑濃度進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)洗脫。
親和層析是一種通過分子間的特異性識(shí)別和相互作用來分離純化物質(zhì)的層析方法。如酶與底物、抗原和抗體之間專一的相互作用等。將其一作為配基固定在填料上,就可以從初始樣品中吸附相應(yīng)的生物分子,然后通過合適的洗脫將其解離達(dá)到純化的目的。
離子交換層析是基于蛋白質(zhì)和離子交換層析介質(zhì)之間的電荷相互作用進(jìn)行分離。離子交換層析介質(zhì)通常帶有正或負(fù)電荷,吸附帶有相反電荷的蛋白質(zhì)。通過調(diào)整緩沖液的離子濃度或pH值,可以改變蛋白質(zhì)與介質(zhì)的結(jié)合強(qiáng)度,實(shí)現(xiàn)不同蛋白質(zhì)的分離。